熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點:
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過程的特異性,植物組織原位雜交,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏,可以檢測出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測單個基因序列。
快速簡便:FISH技術(shù)操作簡便,雜交過程可以在數(shù)小時或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過于復(fù)雜的設(shè)備,便于在實驗室開展。
原位雜交技術(shù)的原理是什么?有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標(biāo)記??蓮牡灼先∠峦该骷垼ㄟ^對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
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